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香椿又名春芽树、椿、椿树，在《植物名实图考》中称为红椿，属楝科香椿属落叶乔木，是我国特有树种，分布于华北至华南和西南各省。研究发现香椿叶含有黄酮类化合物。鉴于黄酮类化合物具有保肝、降血压、抗炎、泻下、解痉等多种生理活性功效，香椿叶黄酮类化合物的研究日益引起了人们的重视。**药用植物中总黄酮的测定方法主要有紫外分光光度法、铝盐显色可见光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法和毛细管电泳法等。薄层色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法主要用于测定黄酮单体成分，总黄酮的测定主要采用分光光度法。AICl3显色分光光度法测定香椿叶总黄酮的方法研究尚未见报道，作者研究用显色可见光分光光度法测定香椿叶中总黄酮的方法，旨在建立一种快速、经济简便的光度分析法。

1实验部分
1.1仪器与试剂

uv/Vis2802PCS型分光光度计（尤尼柯（上海）仪器有限公司）；7230G型可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；E01140型电子分析天平(Swizerland)；PHS-3C型精密pH计（上海精密科学仪器有限公司雷磁仪器厂）；GZX-9140MBE电热恒温鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；芦丁（四川光泰制药有限公司产品）；体积分数95%；AICl3，，冰均为分析纯。水为自制新鲜蒸馏水。

所用香椿叶于2005年11月下旬采自中南林业科技大学株洲校区，由中南林业科技大学刘克旺教授鉴定。采后冲洗并将叶片与叶轴分开，叶片在烘箱中50℃烘至手捏碎（粒度约1mm），碎片贮于干燥器中置暗处保存备用。

1.2实验方法

准确称取经105℃干燥至恒量的芦丁标准试剂0.0752g，用体积分数30%60℃水浴溶解，并定量转入250mL容量瓶中，用30%定容，摇匀得0.3008g/L标准溶液。

称取15g香椿叶片放入250mL锥形瓶中，水浴加热控制80℃，用体积分数80%的，在1：10（*1次）、15（第2、3、4次）料液比的条件下，浸提4次，每次2h，过滤，用少许80%的洗涤滤渣，合并滤液和洗液，得香椿叶总黄酮提取液486mL

准确移取一定量的芦丁标准溶液或香椿黄酮提取液于25mL容量瓶中加入1.0mL0.5mol/LAICl3溶液摇匀放置15min,再用pH5.8的NaAcHAc缓冲溶液定容混匀，超声振荡5min后以空白试剂为参比，用1cm吸收皿在415nm波长处测其吸光度。

2结果与讨论
2.1测定波长的选择

准确吸取1.0mL的芦丁标准溶液或香椿黄酮提取液直接和按实验方法显色，再分别用pH3.6、4.0、5.0、5.8的NaAc-HAc缓冲溶液定容混匀，超声振荡5min后在分光光度计上用1cm比色皿在波长从300～600nm区间扫描（以试剂空白作参比），波长间隔选1nm。芦丁标准溶液显色前、后扫描曲线见图1，香椿叶总黄酮提取液显色前、后扫描曲线见图2。

由图1、2可知：芦丁标准溶液和香椿叶黄酮提取液显色后都在415nm附近有较大吸收，且两者在用pH5.8的NaAc-HAc缓冲溶液定容后的扫描曲线的较大波长较接近415nm故本实验选用pH5.8的NaAc-HAc缓冲溶液，415nm为测定波长。

2.2显色剂AICl3用量的选择

按实验方法取1.0mL的标准溶液，分别加入0.4～1.4mL(间隔为0.2mL)0.5mol/LAIC1，溶液，测定A值。结果表明：0.5mol/L溶液用量在0.8～1.4mL范围内，对标准溶液显色后的吸光度影响很小，本试验选用0.5mol/L溶液1.0mL。

2.3显色温度的选择

取1.0mL的标准溶液按实验方法，控制显色温度为12、15、20、25、30、35℃显色后测定A值。结果表明：显色温度在12～35℃范围内，对标准溶液显色后的吸光度影响很小。本试验采用室温条件。

2.4显色时间的选择